薄層掃描儀的兩大類型及應用
點擊次數(shù):1681 更新時間:2019-04-24
薄層掃描儀是對薄層色譜進行定量檢測分析的儀器,當前市場上有兩類薄層色譜掃描儀:
傳統(tǒng)掃描儀
是一種全波長掃描儀,提供波長200-800nm范圍的可選波長,通過檢測樣品對光的吸收強弱確定物質(zhì)含量。該掃描儀也能檢測254nm或365nm紫外照射產(chǎn)生的熒光強度,從而進行特異性檢測。
傳統(tǒng)掃描儀的掃描方式分為:單光束掃描、雙光束掃描和雙波長掃描。
單光束掃描:采用單一光束(即單一波長掃描),其結(jié)果就是上圖中一特定波長條件下的單條曲線。儀器結(jié)構(gòu)簡單,但是基線不穩(wěn),實際中很少使用。
雙光束掃描:采用同一波長的兩個光束同步掃描,一個光束掃描樣品展開通道,另一個光束掃描樣品通道旁邊的空白區(qū)域,這樣就可扣除空白吸收,部分消除薄層板展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。但是無法消除垂至于展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。
雙波長掃描:兩個不同波長的光束交替掃描樣品展開的通道區(qū)域,波長選擇時,一個波長為樣品大吸收位置,另一是吸收極小值位置。如上圖所示,如檢測目標為3(則大吸收峰為290nm,極小值可選200nm、260nm或325nm)。這種方法可基本消除鋪板不均產(chǎn)生的誤差,因此掃描基線很穩(wěn)定。
以上各種掃描方式中,根據(jù)光源大?。⊕呙杈龋┎煌煞譃橹本€掃描和鋸齒掃描。
直線掃描:用可以覆蓋樣品展開通道的寬光束一次性掃完整個展開通道,即在展開方向上(圖中橫坐標),每個點的數(shù)據(jù)只是一個掃描數(shù)據(jù)點。
鋸齒掃描:采用點狀光源,光點尺寸小于通道寬度,因此在展開方向移動到任何一點時,光源都要逐點沿樣品通道方向掃描,即形成“之”形(或鋸齒形掃描)。這樣,在展開方向上每一點的數(shù)據(jù)都是多個點掃描結(jié)果的累加值。鋸齒掃描的精度相對直線掃描明顯提高。
當前,在定量分析中,薄層掃描多采用雙波長鋸齒掃描。
分析誤差
薄層分析的誤差包括三個方面:點樣誤差、展開誤差、定位誤差和檢測誤差。
采用自動點樣器,誤差可控制在0.5%,熟練的分析人員用毛細管點樣,誤差小于1.0%,若用微量進樣器,誤差會大一些。
展開誤差來自鋪板的均勻性和樣品展開效果,若采用預制的薄層板,誤差會明顯降低,采用雙波長鋸齒掃描,也能有效降低展開誤差。
定位誤差值斑點的位置和大小判定,擴散、脫尾等易產(chǎn)生定位誤差。檢測誤差來自光源的穩(wěn)定性、光檢測器的穩(wěn)定性以及樣品對光吸收(或熒光產(chǎn)生)的線性度等方面。為減少這些誤差,需要非常精密的機電系統(tǒng),這也直接導致產(chǎn)品高昂的價格。
通常情況下,薄層掃描分析的誤差在3%以下。
薄層數(shù)碼成像分析儀
薄層數(shù)碼成像分析技術是利用數(shù)碼成像設備獲得薄層板上各點的光強度信息,之后對獲得圖像進行分析的薄層分析技術。數(shù)碼成像設備包括兩種:照相機和掃描儀(由于數(shù)碼掃描儀采用逐行成像技術,為便于區(qū)分傳統(tǒng)薄層掃描儀的逐點掃描,將數(shù)碼掃描儀稱為逐行掃描儀)。
和傳統(tǒng)薄層掃描一樣,照相機或逐行掃描儀都具有光檢測系統(tǒng),它們都是將光量線性轉(zhuǎn)化為電信號的元件。不同的是,照相機和逐行掃描儀可進一步將電信號轉(zhuǎn)換成電腦圖像,圖像中單個點(像素)的顏色深淺反映了光的強弱。
因此,薄層數(shù)碼成像更接近人眼觀察檢測,結(jié)果更直觀,因此非常適合鑒別,特別是中藥指紋圖譜的識別。
數(shù)碼成像儀不僅能完成普通白光照射下的成像分析,再裝配254nm或365nm紫外燈后,也可以檢測特異熒光,特異熒光檢測。